Группа tnf: Интернет-магазин одежды и экипировки The North Face (Норт Фейс)

: T.N.F.

1. Хэнк, у вашей группы необычное название, которое трудно понять без расшифровки. Что значит TNF? Почему вы решили так себя назвать? TNF — Terror National Front. Я думаю, на всех языках это звучит одинаково и в переводе не нуждается. Это отображает нашу позицию и идеологию, поэтому так и назвались. 2. Расскажи, пожалуйста, об истории вашей команды: как все начиналось, кто сейчас играет в вашем составе. Наш музыкальный путь начался в 1996 году, когда мы стали командой Белого сопротивления. С этого времени прошло много лет и очень многие вещи изменились. Мы стали более зрелыми людьми, наша позиция стала более конкретной. К сожалению, не обходилось и без трудностей. Однажды группа была на грани развала. Только благодаря поддерживающим нас людям мы выжили и продолжаем нашу борьбу. Начинали мы в Ярославле, где и давали первые концерты. Из начального состава остался только я один. Постепенно образовался тот состав, который есть и сейчас: Я вокал, Саша Борода гитара, Саша бас-гитара, Дима ударные. Все они молоды, но без каждого из них не было бы того, что называется ТНФ. 3. Какие у вас есть записи на аудио, видео и на компакте? Какие были концерты в России и за рубежом? Сейчас у нас вышел новый альбом Во имя павших героев на кассетах и компакт-дисках, также у нас есть пара альбомов на кассетах: Made in Moscow 1999 г., Here we go 2000 г. Есть еще видео-кассета с нашим концертом и интервью под названием Русский удар/ TNF. Наша концертная деятельность не слишком обширна, но стараемся выступать по мере возможностей. В основном концерты проходили в Москве, но также в наш актив можно занести концерты в Калуге и в польском городе Щецине. В ближайшее время мы собираемся посетить многие города России с концертами. 4. Я слушал ваши вещи в коллекциях Бритоголовые идут. Мне особенно нравится Русский щит. Сделал для своих друзей подборку правого рока под этим названием. Можно я опубликую полный текст песни на страницах журнала? Да, конечно. Песня Русский щит одна из первых в нашем творчестве и она посвящена русским солдатам, сражающимся за свободу нашей Родины.   5. Что нового TNF планирует записать и выпустить в ближайшем будущем? Мы планируем выпустить совместный с группой Вандал компакт-диск под названием Кровь и Честь России. Там мыпредставим по нескольку песен от каждой группы. Следующий альбом мы будем выпускать не раньше осени. 6. Есть ли у вас контакты с зарубежными группами White Power? Мы имеем дружеские отношения с рядом команд из Восточной Европы, в частности, с польской группой HONOR. Выступали с ними и в Польше, и в России. Может быть, удастся выпустить совместный компакт-диск. Договоренность уже имеется. Также мы контактируем с рядом сербских команд и с группой из Чили ODALSIEG. 7. У нас с вами есть общие друзья в Польше лидеры праворадикального движения Niklot. Расскажи, как вы с ними познакомились, и что удалось сделать вместе. Действительно, мы познакомились с людьми из NIKLOT в Польше.  Они также несколько раз посещали Россию. От них поступило приглашение выступить на проводимом ими ежегодном VIKINGFEST, который проводится на балтийском побережье. 8. Некоторые воспринимают TNF как хулиганскую группу. Я так не считаю. Я думаю, что вы делаете очень важное дело для просвещения и организации русской молодежи. Изложи, пожалуйста, основные принципы вашей идеологии. Мы не являемся простой хулиганской группой, мы ПРАВОРАДИКАЛЬНАЯ группа, то есть мы не ограничиваем свою деятельность бренчанием на гитарах. Идеология наша проста и понятна каждому правому патриоту За Расу и Нацию! 9. Что бы ты хотел пожелать своим ровесникам? Своим ровесникам я пожелал бы не отделяться от молодых скинхэдов, помогать и воспитывать молодёжь, так как за ними будущее нашего движения.  10. Я знаю, что журнал АТЕНЕЙ пользуется спросом среди фанатов TNF. А каково твое мнение о нем? Какие пожелания ты хотел бы высказать нашему журналу? Действительно, Атеней очень нужный журнал, так как несет огромную смысловую и информационную нагрузку. Радует разнообразие тем, затронутых на его страницах. Виден высокий интеллектуальный уровень. Желаю оставаться такими же востребованными, интересными и качественными.       Всем правым патриотам наш салют!                                             Blood& Honour/TNF

Рекомбинантный укороченный белок TNF-BD вируса натуральной оспы проявляет специфическую фармакологическую активность в экспериментальной модели септического шока

Vavilovskii Zhurnal Genet Selektsii. 2020 May; 24(3): 239–243.

Language: Russian | English

И.П. Гилева

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово, Новосибирская область, Россия,

С.Н. Якубицкий

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово, Новосибирская область, Россия,

И.В. Колосова

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово, Новосибирская область, Россия,

С.Н. Щелкунов

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово, Новосибирская область, Россия, Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук, Новосибирск, Россия,

И.П. Гилева, Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово, Новосибирская область, Россия,

Received 2019 Dec 6; Revised 2020 Jan 27; Accepted 2020 Jan 30.

This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License

Abstract

Фактор некроза опухолей (TNF) – один из основных цитокинов, медиаторов иммунной системы, обеспечивающих защиту организма человека от вирусных инфекций. В процессе эволюции антропогенный вирус натуральной оспы (Variola virus, VARV) освоил эффективные механизмы преодоления иммунологических барьеров человека, кодируя в своем геноме белки, способные взаимодействовать с рецепторами цитокинов организма-хозяина, блокируя таким образом их активность. В частности, ген G2R этого вируса кодирует белок CrmB, который эффективно связывает TNF человека и мышей. При этом данный белок является двухдоменным и наряду с TNF-связывающим N-концевым доменом содержит С-концевой хемокин-связывающий домен. При использовании методологии молекулярного клонирования нами ранее получен рекомбинантный бакуловирус, продуцирующий в клетках насекомых рекомбинантный белок CrmB вируса натуральной оспы (VARV-CrmB), и показан его TNF-нейтрализующий потенциал в различных тестах in vitro и in vivo. С целью снижения иммуногенности этого вирусного белка при его многократном введении для терапии хронических воспалительных заболеваний получена рекомбинантная плазмида, направляющая в клетках Escherichia coli биосинтез укороченного однодоменного TNF-связывающего (TNF-BD) белка VARV. Методом металл-хелатной аффинной хроматографии из клеток выделен рекомбинантный белок TNF-BD. Терапевтический потенциал белка TNF-BD изучен в экспериментальной модели септического шока, индуцированного в организме мышей введением бактериального липополисахарида (ЛПС). После индукции септического шока животным вводили разные дозы рекомбинантного белка TNF-BD и регистрировали их гибель в течение 7 сут. Все мыши, не получавшие препарат белка TNF-BD после инъекции ЛПС, погибли через 3 сут, а в группах животных, которым вводили TNF-BD, в зависимости от дозы этого белка выжили 30, 40 или 60 % мышей. Результаты исследования демонстрируют наличие специфической фармакологической активности у рекомбинантного белка TNF-BD, синтезированного в бактериальных клетках, в мышиной модели ЛПС-индуцированного септического шока.

Keywords: белок VARV-CrmB, вирус натуральной оспы, ЛПС, септический шок, TNF-связывающий домен

Abstract

Tumor necrosis factor (TNF) is one among the key cytokines that mediate the immune system to protect humans against viral infections. Throughout evolution, anthropogenic Variola virus (VARV) has developed effective mechanisms to overcome human defense reactions. The viral genome encodes soluble proteins imitating the structure of cellular cytokine receptors. These proteins compete with cellular receptors for cytokine binding, thus blocking the antiviral immune response. In particular, the G2R gene of VARV encodes the TNF decoy receptor, VARV-CrmB protein. This protein consists of N-ended TNF-biding (TNF-BD) and C-ended chemokine binding (Ch-BD) domains. Recombinant VARV-CrmB protein has been produced in insect cells using molecular cloning methods and its TNF neutralizing activity has been shown in vitro and in vivo. To decrease the immunogenicity of this protein, a recombinant plasmid coding for shortened TNF-BD protein of VARV in Escherichia coli cells has been constructed. Using the method of immobilized metal affinity chromatography, recombinant TNF-BD protein corresponding to the TNF-biding domain of VARV-CrmB protein was purified from E. coli cells. The therapeutic potential of TNF-BD was studied using an experimental model of LPS-induced septic shock. After septic shock induction, several doses of recombinant TNF-BD were injected and the mortality of experimental animals was observed during 7 days. All mice not injected with TNF-BD had been dead by day 3 of the experiment, but 30, 40 and 60 % of the experimental animals, who received different TNF-BD doses, survived in a dose-dependent manner. Data obtained demonstrate that recombinant TNF-BD protein is pharmacologically active in the experimental model of LPS-induced septic shock.

Keywords: VARV-CrmB protein, variola virus, LPS, septic shock, TNF-biding domain

Введение

В процессе коэволюции у вируса натуральной оспы (ВНО) появились многочисленные эффективные механизмы преодоления иммунологических барьеров человека. В частности, вирусный геном детерминирует синтез секретируемых белков, имеющих структурное сходство с клеточными рецепторами цитокинов. Вирусные белки функционируют как связывающие цитокины рецепторы, блокируя таким образом их активность (Shchelkunova, Shchelkunov, 2016). Способность вирусных белков эффективно взаимодействовать с иммунной системой человека открывает перспективу их использования для разработки иммуномодулирующих терапевтических средств нового поколения.

Некоторые TNF-блокаторы – Remicade® (Centocor, Inc., Malvern, PA, США), Enbrel® (Immunex Corp, Seattle, WA, США), Humira™ (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, США), действующим началом которых являются моно- клональные антитела или химерные белки, состоящие из TNF-рецепторных и иммуноглобулиновых доменов, прошли клинические испытания и разрешены для применения в медицинской практике, но не один из перечисленных препаратов не оказался эффективным против септического шока (Monaco et al., 2015). Продемонстрированная in vivo и in vitro высокая TNF-нейтрализующая активность белка VARV-CrmB вируса натуральной оспы (Gileva et al., 2006; Shchelkunova, Shchelkunov, 2016) позволяет надеяться, что основой терапевтических пре- паратов нового поколения может стать этот белок.

Эндотоксический шок, индуцированный липополисахаридом (ЛПС) грамотрицательных бактерий (реакция Шварцмана), – широко используемая экспериментальная модель септического шока (Leturcq et al., 1995; Lamping et al., 1998; Fei et al., 2011). Введение рекомбинантного белка VARV-CrmB мышам с ЛПС-индуцированным септическим шоком приводило к достоверному увеличению выживаемости мышей и отчетливому снижению гистопатологических изменений внутренних органов по срав- нению с контрольными животными (Gileva et al., 2006).

Полноразмерный рекомбинантный белок VARV-CrmB имеет молекулярную массу 47 кДа, и в его структуре выделяют N-концевой TNF- (TNF-BD) и С-концевой хемокин-связывающий (Сh-BD) домены (Alejo et al., 2006). С целью уменьшения иммуногенности рекомбинантного белка VARV-CrmB ранее нами получен его укороченный однодоменный вариант TNF-BD. Показаны биологическая активность белка TNF-BD in vitro (ингибирование как цитотоксичности TNF для культуры клеток фибробластов мыши L929, так и TNF-индуцированной окислительно- метаболической активности лейкоцитов крови мышей) (Цырендоржиев и др., 2014; Трегубчак и др., 2015), а также пониженная иммуногенность относительно полнораз- мерного белка (Непомнящих и др., 2017).

Цель настоящего исследования – изучение специфи- ческой фармакологической активности укороченного однодоменного рекомбинантного белка TNF-BD вируса натуральной оспы in vivo, а именно – в экспериментальной модели ЛПС-индуцированного септического шока.

Материалы и методы

Реагенты. Для приготовления жидких и твердых пита- тельных средств использовали бактопептон, дрожжевой экстракт и бактоагар (Difco, США), антибиотики ампициллин, тетрациклин и канамицин (Sigma, США). Ре- комбинантную плазмидную ДНК выделяли с помощью набора Qiagen Plasmid Midi Kit (QIAGEN, Германия). В работе были применены также реактивы фирмы Sigma (США): имидазол, ЛПС Escherichia coli 055:B5, мочевина, фенилметилсульфонилфторид (PMSF), IPTG.

Рекомбинантные плазмиды и бактериальные штаммы. Рекомбинантная плазмида pQE60-TNF-BD любезно предоставлена Т.В. Трегубчак (Трегубчак и др., 2015). Для амплификации этой плазмиды использовали штамм E. coli XL10-Gold (QIAGEN, Германия), а для нара- ботки рекомбинантного белка TNF-BD – штамм E. coli SG13009[pRep4] (QIAGEN, Германия). Компетентные клетки E. coli XL10-Gold и E. coli SG13009 получали по методу (Mandel, Higa, 1970).

Бактериальные среды. Для культивирования штамма E. coli SG13009[pRep4], содержащего pQE60-TNF-BD, ис- пользовали стандартную LB-среду (Sambrook et al., 1985).

Электрофорез, хроматография. Фракционирование белков проводили в SDS-ПААГ по стандартной методике (Laemmli, 1970), с помощью маркеров молекулярных масс белков PageRuler™ Plus Prestained Protein Ladder (Thermo Scientific, США) (11, 17, 28, 36, 55, 72, 95, 130, 250 кДа). Металл-хелатную афинную хроматографию проводили, используя Ni-NTA агарозу (QIAGEN, Германия), на ко- лонке объемом 1 мл. Концентрацию белка определяли по методу (Bradford, 1976).

Животные. В эксперименты брали самок мышей линии BALB/c с массой тела 19–21 г (возраст 8–9 нед), полученных из вивария Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспо- требнадзора (Кольцово, Новосибирская область, Россия). Мышей содержали при естественном световом режиме и постоянном доступе к воде и пище. Животных выводили из эксперимента в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите животных, используемых для экспериментальных целей.

Результаты

Наработка рекомбинантного белка TNF-BD. Для полу- чения инокулятов были взяты индивидуальные колонии Ap^r-, Km^r-, TcM^r-трансформантов E. coli SG13009[pRep4]. Инокулят разводили свежим L-бульоном (1:50), содержа- щим 100 мкг/мл ампициллина и по 30 мкг/мл канамицина и тетрациклина. Бактериальную культуру инкубировали при 37 °С и интенсивной аэрации до достижения оптической плотности культуры А₅₅₀ = 0.3–0.5, затем добавляли индуктор IPTG до концентрации 1 мМ (продолжительность индукции 4 ч). Клетки собирали низкоскоростным центрифугированием и ресуспендировали в 5 мл буфера следующего состава: 10 % сахароза, 100 мМ Трис-HCl, pH 7.3, 5 мМ ЕДТА, 20 мкг/мл PMSF. Затем бактериальные клетки разрушали ультразвуком на установке Soniprep (MSE, США; 10 циклов по 1 мин с интервалами между циклами в 30 с). Как было показано ранее (Трегубчак и др., 2015), рекомбинантный белок TNF-BD синтезируется в клетках E. coli в виде «телец включения». Для выделения целевого продукта тельца включения солюбилизовали в буфере А (100 мМ NaH₂PO₄, 10 мМ Трис-НCl, pH 8.0, 300 мМ NaCl, 10 мМ имидазол, 6 М мочевина) и суперна- тант наносили на колонку с Ni-NTA агарозой (V = 1 мл), уравновешенную 5 мл этого же буфера. Колонку про- мывали (2 мл × 3) буфером В (100 мМ Nah3PO4, 10 мМ Трис-НCl, pH 6.3, 300 мМ NaCl, 20 мМ имидазол, 6 М мочевина) и элюировали целевой продукт буфером С (100 мМ NaH₂PO₄, 10 мМ Трис-НCl, pH 8.0, 300 мМ NaCl, 250 мМ имидазол) (0.3 мл × 5). Фракции выделения анализировали в 10 % ПААГ. Результаты выделения представлены на рис. 1. Фракции, содержащие целевой продукт, объединяли. Таким образом, был выделен пре- парат рекомбинантного белка TNF-BD, чистота которого, по данным электрофореза, составляла около 90 %.

Исследование токсичности рекомбинантного белка TNF-BD. Для того чтобы определить способность пре- парата укороченного однодоменного белка TNF-BD предотвращать взаимодействие мышиного TNF со специфи- ческими рецепторами эукариотических клеток, изучали его активность в тесте нейтрализации цитотоксического действия mTNF на культуре клеток мышиных фибробластов L929, как описано в работе (Трегубчак и др., 2015). Для определения токсичности рекомбинантного белка взяли две группы мышей линии BALB/c (каждая группа содержала пять животных). Одной группе вводили внутрибрюшинно физиологический раствор, другой – ре- комбинантный белок в дозе 50 мкг/мышь. Наблюдение вели в течение 7 сут, за этот период не было обнаружено проявлений токсичности рекомбинантного белка.

Исследование специфической фармакологической активности белка TNF-BD в экспериментальной модели септического шока. Предварительно для мышей линии BALB/c была определена доза ЛПС E. coli 055:B5, вызывающая гибель 100 % животных (ЛД100 ), равная 20 мг/ кг веса. Животные были объединены в пять групп (по 10 особей в группе). Мышам в группах 1–3 внутрибрюшинно вводили рекомбинантный белок TNF-BD в дозах 0.2, 2 или 20 мкг/мышь. Через 30 мин этим живот- ным внутрибрюшинно инъецировали раствор ЛПС E. coli (O55:B5) в дозе 1 ЛД100. Группе сравнения (группа 4) вводили только ЛПС, а группе отрицательного контроля (группа 5) – натрий-фосфатный буфер. После введения препаратов мышам регистрировали их гибель в течение 7 сут. Результаты эксперимента показаны на рис. 2: на конец эксперимента выживаемость животных в группе 5 составила 100 %, в группе 4 – 0 %, а в группах 1–3 – 30, 40 и 60 % соответственно.

Electrophoretic resolution of proteins.

(a) PAGE resolution of E. coli cell lysates with 10 % SDS. Lanes: 1, protein ladder; 2–4, SG13009[pRep4, pQE60-TNF-BD]; 5, SG13009[pRep4]. (b) PAGE resolution of recombinant TNF-BD protein fractions with 12 % SDS. Lanes: 1, fraction of insoluble cell proteins of E. coli SG13009[pRep4, pQE60-TNF-BD] solubilized in buffer A; 2, 3, loading onto a column with Ni-NTA agarose equilibrated with buffer A; 4, 5, washing the column with buffer B; 6–10, elution of the target product with buffer C; 11, protein ladder.

Survival of experimental animals with LPS-induced endotoxic shock after administration of the recombinant TNF-BD protein.

Обсуждение

Cигнальная система, активируемая TNF, – один из основных факторов, обусловливающих развитие воспалительного процесса. Гиперпродукция TNF может приводить к гибели организма в результате развития системной воспалительной реакции или септического шока. Сепсис и септический шок до настоящего времени представляют одну из основных проблем здравоохранения. Ежегодно они являются причиной смерти более миллиона человек (Seymour, Rosengart, 2015). TNF-антагонисты, действующим началом которых были моноклональные антитела (Infliximab, Adalimumab) или аналог клеточных рецепторов (Etanercept), прошли клинические испытания и разрешены для применения в медицинской практике, но не один из этих препаратов не проявил терапевтической активности против септического шока (Monaco et al., 2015). Поэтому поиск новых классов соединений, обладающих TNF-нейтрализующей активностью, остается актуальной проблемой.

Существование вирусных белков, способных связывать цитокины и, в частности TNF, блокируя таким образом его активность (Shchelkunova, Shchelkunov, 2016), позволяет предположить возможность разработки нового поколения TNF-антагонистов на основе TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы (VARV-CrmB). Ранее нами по- лучен рекомбинантный бакуловирус BVi67, несущий ген белка VARV-CrmB, а из инфицированных им клеток насекомых линии Sf21 выделен рекомбинантный вирусный белок. Рекомбинантный белок VARV-CrmB эффективно нейтрализует эффекты TNF в экспериментальных системах in vitro и in vivo (Gileva et al., 2006). Особенно следует подчеркнуть его выраженный терапевтический эффект на проявление ЛПС-индуцированного септического шока у мышей, что отчетливо снижает гистопатологические из- менения внутренних органов и достоверно увеличивает выживаемость животных (Gileva et al., 2006). Новый TNF-антагонист, кроме TNF-нейтрализующего потенциала, должен обладать низкой иммуногенностью, так как эффективность применения препарата может быть снижена из-за развития иммунного ответа на терапевтический белок (Chen et al., 2015; Eng et al., 2015).

Полноразмерный рекомбинантный белок VARV-CrmB (47 кДа) обладает способностью к олигомеризации, это может снизить его терапевтический потенциал при по- вторном или многократном применении. Белок VARVCrmB состоит из TNF- и хемокин-связывающего доменов (Alejo et al., 2006). Нами сделано предположение, что однодоменный укороченный TNF-связывающий белок сохранит свою терапевтическую активность и будет обладать существенно меньшей иммуногенностью. Был получен бактериальный продуцент укороченного белка TNF-BD, соответствующего TNF-связывающему домену белка VARV-CrmB, и экспериментально доказана его способность ингибировать цитотоксичность TNF на клетках мышиных фибробластов L929 и TNF-индуцированную окислительно-метаболическую активность лейкоцитов крови мышей (Цырендоржиев и др., 2014; Трегубчак и др., 2015). При этом рекомбинантный TNF-BD проявлял сниженную иммуногенность относительно белка VARVCrmB при многократном введении экспериментальным животным (Непомнящих и др., 2017).

В настоящем исследовании изучен терапевтический потенциал короткого рекомбинантного однодоменного белка TNF-BD в экспериментальной модели септического шока. С этой целью белок TNF-BD выделили из клеток E. coli методом металл-хелатной аффинной хроматографии, как это показано на рис. 1, а и б. При его внутрибрюшинном введении мышам линии BALB/c установлено отсутствие токсичности. Для мышей этой линии экспериментально определена доза ЛПС E. coli (O55:B5), вызывающая 100 % гибель животных (ЛД100 ). При внутрибрюшинном введении ЛПС и белка TNF-BD в нашей работе впервые продемонстрирована дозозависимая специфическая фармакологическая активность низкоиммуногенного укороченного рекомбинантного белка TNF-BD в модели ЛПС- индуцированного септического шока (см. рис. 2).

Следует отметить, что вопрос правомерности использования мышиной модели эндотоксимии (реакции Щварцмана) для выявления новых препаратов для терапии септического шока у людей остается дискуссионным. Основанием для скептического отношения к мышиной модели служат отличия результатов транскриптомных анализов, механизмов развития врожденного и приобретенного иммунных ответов, гетерогенность человеческой популяции versus гомогенности инбредных линий мышей (Efron et al., 2015; Stortz et al., 2017). Не исключено, что препараты, проявившие высокую эффективность в мыши- ной модели сепсиса, не будут эффективными для человека, как это случилось с препаратом Centocor (Thayer, 1993). Однако простота проведения эксперимента и воспроизводимость результатов делают эту модель незаменимой для первичного скрининга TNF-связывающих терапевтических препаратов.

Заключение

На основании проведенного исследования можно сделать вывод, что рекомбинантный белок TNF-BD вируса нату- ральной оспы является перспективным для разработки нового поколения TNF-антагонистов. Этот белок может служить модельным объектом для изучения взаимо- действия вирусных белков с компонентами иммунной системы организма человека. Методами делеционного анализа и мутагенеза, рентгеноструктурного анализа, компьютерного моделирования возможно идентифициро- вать в структуре белка TNF-BD аминокислотные остатки, осуществляющие взаимодействие с TNF и составляющие конкуренцию клеточным рецепторам.

Conflict of interest

The authors declare no conflict of interest.

References

Непомнящих Т.С., Трегубчак Т.В., Якубицкий С.Н., Таранов О.С., Максютов Р.А., Щелкунов С.Н. Кандидатные антиревматиче- ские плазмидные конструкции обладают низкой иммуноген- ностью. Вавиловский журнал генетики и селекции. 2017;21(3): 317-322. DOI 10.18699/VJ17.249. [Nepomnyashchikh T.S., Tregubchak T.V., Yakubitskiy S.N., Taranov О.S., Maksyutov R.A., Shchelkunov S.N. Candidate antirheumatic genotherapeutic plasmid constructions have low immunogenicity. Vavilovskii Zhurnal Genetiki i Selektsii = Vavilov Journal of Genetics and Breeding. 2017;21(3):317-322. DOI 10.18699/ VJ17.249. (in Russian)]

Трегубчак Т.В., Шеховцов С.В., Непомнящих Т.С., Пельтек С.Е., Колчанов Н.А., Щелкунов С.Н. TNF-связывающий домен белка VARV-CrmB, синтезированный в клетках Escherichia coli, эф- фективно взаимодействует с TNF человека. Докл. Акад. наук. 2015;462(4):488-492. DOI 10.7868/S0869565215160276. [Tregubchak T.V., Shekhovtsov S.V., Nepomnyashchikh T.S., Peltek S.E., Kolchanov N.A., Shchelkunov S.N. TNF-binding domain of the variola virus CrmB protein synthesized in Escherichia coli cells effectively interacts with human TNF. Dokl. Biochem. Biophys. 2015;462(1):176-180. DOI 10.1134/S1607672915030102.]

Цырендоржиев Д.Д., Орловская И.А., Сенников С.В., Трегуб- чак Т.В., Гилева И.П., Цырендоржиева М.Д., Щелкунов С.Н. Биологические эффекты индивидуально синтезированного TNF-связывающего домена CrmB вируса натуральной оспы. Бюл. эксп. биол. мед. 2014;157(2):214-217. [Tsyrendorzhiev D.D., Orlovskaya I.A., Sennikov S.V., Tregubchak T.V., Gileva I.P., Tsyrendorzhieva M.D., Shchelkunov S.N. Biological effects of individually synthesized TNF-binding domain of variola virus CrmB protein. Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2014;157(2):249-252. DOI 10.1007/s10517-014-2537-6.]

Alejo A., Ruiz-Arguello M.B., Ho Y., Smith V.P., Saraiva M., Alcami A. A chemokine-binding domain in the tumor necrosis factor receptor from variola (smallpox) virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006;103:5995-6000.

Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 1976;72:248-254.

Chen D.Y., Chen Y.M., Tsai W.C., Tseng J.C., Chen Y.H., Hsieh C.W., Hung W.T., Lan J.L. Significant associations of antidrug antibody levels with serum drug trough levels and therapeutic response of adalimumab and etanercept treatment in rheumatoid arthritis. Ann. Rheum. Dis. 2015;74(3):e16. DOI 10.1136/annrheumdis- 2013-203893.

Efron P.A., Mohr A.M., Moore F.F., Moldawer L.L. The future of murine sepsis and trauma research models. J. Leukoc. Biol. 2015; 98(6):945-952. DOI 10.1189/jlb.5MR0315-127R.

Eng G.P., Bendtzen K., Bliddal H., Stoltenberg M., Szkudlarek M., Fana V., Lindegaard H.M., Omerovic E., Hojgaard P., Jensen E.K., Bouchelouche P.N. Antibodies to infliximab and adalimumab in patients with rheumatoid arthritis in clinical remission: a cross-sectional study. Arthritis. 2015;784825. DOI 10.1155/2015/784825.

Fei Y., Wang W., Kwiecinski J., Josefsson E., Pullerits R., Jonsson I.- M., Magnusson M., Jin T. The combination of a tumor necrosis factor inhibitor and antibiotic alleviates staphylococcal arthritis and sepsis in mice. J. Infeсt. Dis. 2011;204(3):348-357. DOI 10.1093/infdis/ jir266.

Gileva I.P., Nepomnyashikh T.S., Antonets D.V., Lebedev L.R., Kochneva G.V., Grazhdantseva A.V., Shchelkunov S.N. Properties of the recombinant TNF binding proteins from variola, monkepox and cowpox viruses are different. Biochem. Biophphys. Acta. 2006; 1764:1710-1718.

Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriofage T4. Nature. 1970;227:680-685.

Lamping N., Detter R., Schroder N.W., Pfeil D., Hallatschek W., Burger R., Schumann R.R. LPS-binding protein protects mice from septic shock caused by LPS or sram-negative bacteria. J. Clin. Invest. 1998;101(10):2065-2071.

Leturcq D.J., Moriarty A.M., Talbott G., Winn R.K., Martin T.R., Ulevitch R.J. Therapeutic strategies to block LPS interactions with its receptor. Prog. Clin. Biol. Res. 1995;392:473-477.

Mandel M., Higa A. Calcium-dependent bacteriophage DNA infection. J. Mol. Biol. 1970;53:159-162.

Monaco C., Nanchahal J., Taylor P., Feldmann M. Anty-TNF therapy: past, present and future. Int. Immunol. 2015;27(1):55-62. DOI 10.1093/intimm/dxu107.

Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd. edn. Cold Spring Harbor, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.

Seymour C.W., Rosengart M.R. Septic shock: advances in diagnoses and treatment. JAMA. 2015;314(7):708-717. DOI 10.1001/jama. 2015.7885.

Shchelkunova G.A., Shchelkunov S.N. Immunomodulating drugs based on poxviral proteins. BioDrugs. 2016;30(1):9-16. DOI 10.1007/ s40259-016-0158-5.

Stortz J.A., Raymond S.L., Mira J.C., Moldawer L.L., Mohr A.M., Efron P.A. Murine models of sepsis and trauma: Can we bridge the gap? ILAR J. 2017;58(1):90-105. DOI 10.1093./ilar/ilx007. Thayer A. Centocor stops sales, trails or flagship drug. Chem. Eng. News. 1993;71(4):6. DOI 10.1021/cen-v71n004.p006.

Acknowledgments

This work was supported by State Budgeted Project 0324-2019-0041 for ICG and the Russian Foundation for Basic Research, project 18-04-00022A. The authors are grateful to T.B. Tregubchak for providing plasmid pQE60-TNF-BD.

Contributor Information

И.П. Гилева, Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово, Новосибирская область, Россия,

С.Н. Якубицкий, Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово, Новосибирская область, Россия,

И.В. Колосова, Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово, Новосибирская область, Россия,

С.Н. Щелкунов, Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово, Новосибирская область, Россия, Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук, Новосибирск, Россия,

Влияние нокаута по гену урокиназы на уровень TNF- α и его рецепторов в головном мозге мышей при экспериментальной меланоме, развивающейся на фоне хронической нейрогенной боли | Франциянц

1. Commins SP, Borish L, Steinke JW. Immunologic messenger molecules: cytokines, interferons, and chemokines. J Allergy Clin Immunol. 2010; 125(2 Suppl 2): S53-72.

2. Probert L. TNF and its receptors in the CNS: the essential, the desirable and the deleterious effects. Neuroscience. 2015; 302: 2-22.

3. Vanden Berghe T, Linkermann A, Jouan-Lanhouet S, et al. Regulated necrosis: the expanding network of non-apoptotic cell death pathways. Nat Rev Mol Cell Biol. 2014; 15(2): 135-147.

4. Fischer R, Kontermann RE, Maier O. Targeting sTNF/TNFR1 signaling as a new therapeutic strategy. Antibodies. 2015; 4: 48-70.

5. Steeland S, Puimege L, Vandenbroocke RE, et al. Generation and characterization of small single domain antibodies inhibiting human tumor necrosis factor receptor 1. J Biol Chem. 2015; 290(7): 4022-4037.

6. Кит О.И., Франциянц Е.М., Ко-тиева И.М. и др. Динамика тканевой системы регуляторов плазминогена при меланоме кожи на фоне хронической боли у самок мышей. Трансляционная медицина. 2018; 5(2): 38-46.

7. Франциянц Е.М., Каплиева И.В., Сурикова Е.И. и др. Влияние нокаута по гену урокиназы на рост меланомы в эксперименте. Сибирский научный медицинский журнал. 2019; 39(4): 62-70.

8. Idell RD, Florova G, Komissarov AA, et al. The fibrinolytic system: A new target for treatment of depression with psychedelics. Med Hypotheses. 2017; 100: 46П53.

9. Liguz-Lecznar M, Zakrzewska R, Kossut M. Inhibition of Tnf-a R1 signaling can rescue functional cortical plasticity impaired in early post-stroke period. Neurobiol Aging. 2015; 36(10): 2877-2884.

10. Chen BL, Li YQ, Xie DH, et al. Blocking TNF-a with infliximab alleviates ovariectomy induced mechanical and thermal hyperalgesia in rats. Neurol Sci. 2012; 33(3): 527-533.

11. Bouris P, Skandalis SS, Piperigkou Z, et al. Estrogen receptor alpha mediates epithelial to mesenchymal transition, expression of specific matrix effectors and functional properties of breast cancer cells. Matrix Biol. 2015; 43: 42-60.

12. Liu Y, Zhou L-J, Wang J, et al. TNF-a differentially regulates synaptic plasticity in the hippocampus and spinal cord by microglia-dependent mechanisms after peripheral nerve injury. J Neurosci. 2017; 37(4): 871-881.

13. Buoncervello M, Maccari S, Ascione B, et al. Inflammatory cytokines associated with cancer growth induce mitochondria and cytoskeleton alterations in cardiomyocytes. J Cell Physiol. 2019; 234(11): 2045320468.

14. Camara ML, Corrigan F, Jaehne EJ, et al. TNF-a and its receptors modulate complex behaviours and neurotrophins in transgenic mice. Psychoneuroendocrinology. 2013; 38(12): 3102-3114.

Ассоциация полиморфных маркеров генов CTLA4 и TNF с эндокринной офтальмопатией у пациентов русского происхождения с болезнью Грейвса

Аннотация

Цель исследования. Анализ ассоциаций полиморфного маркера rs3087243 гена CTLA4 и полиморфного маркера rs1800629 гена TNF с эндокринной офтальмопатией (ЭОП) у пациентов русского происхождения с болезнью Грейвса (БГ). Материалы и методы. В исследовании случай—контроль включили 205 пациентов с БГ. Изучали распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров rs3087243 гена CTLA4 и rs1800629 гена TNF у 141 пациента с БГ и ЭОП (группа БГ+ЭОП) и 64 пациентов с БГ без ЭОП (БГ-ЭОП). Аллели полиморфных маркеров идентифицировали методом полимеразной цепной реакции с последующим анализом длин рестриктазных фрагментов. Результаты. У пациентов с БГ в анамнезе и ЭОП достоверно повышены частоты аллеля А и генотипа АА и снижена доля аллеля G и генотипа GG полиморфного маркера rs3087243 гена CTLA4. Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов полиморфного маркера rs1800629 гена TNF достоверных различий не выявил. Заключение. Полиморфный маркер rs3087243 гена CTLA4 ассоциирован с риском развития ЭОП у пациентов с БГ русского происхождения.

Ключевые слова: болезнь Грейвса, эндокринная офтальмопатия, гены CTLA4 и TNF, ассоциация с риском развития ЭОП у пациентов с болезнью Грейвса

Авторы

Мартиросян Н.С.1, Бурденный А.М.2, Трухина Л.В.1, Пантелеева О.Г.3, Саакян С.В.4, Петунина Н.А.5, Носиков В.В.6

1 ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» МЗ РФ
2 ФГБУ «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», ул. Балтийская, 8, Москва, 125315, Российская Федерация
3 Дорожная клиническая больница на ст. Горький ОАО РЖД
4 ФГБУ «Московский НИИ глазных болезней им. Гельмгольца» Минздрава России, Москва
5 Кафедра эндокринологии Первого Московского государственного медицинского университета им. И.М. Сеченова
6 Институт биохимической физики им. Н.М. Эмануэля РАН

Список литературы

Динамика IL-1, IL-4, IL-10 и TNF-alpha у больных рассеянным склерозом на фоне терапии пентоксифиллином

В настоящее время считается, что основная роль в патогенезе рассеянного склероза (РС) принадлежит аутоиммунным и иммунопатологическим процессам. Доказательством этого является тот факт, что в ЦНС, ликворе и сыворотке крови больных РС присутствуют активированные иммунокомпетентные клетки, отмечается повышенный синтез в ткани мозга и ликворе иммуноглобулинов, чаще IgG, образующего в спинномозговой жидкости (СМЖ) олигоклональные группы, а также антитела к антигенам миелина и вирусам. Кроме того, отмечается повышенный уровень экспрессии молекул адгезии и антиген-представления в «острых» бляшках. Фактом, подтверждающим участие иммунной системы в возникновении и течении РС, является эффективность иммуносупрессоров при обострениях [1].

Существует мнение, что активность заболевания обусловлена дисбалансом между провоспалительными (IL-1, TNF-α) и противовоспалительными (IL-4, IL-10) цитокинами, который играет основную роль в реализации и поддержании воспаления [3, 4]. Провоспалительные цитокины макрофагального происхождения, в частности TNF-α, играют основную роль в запуске и хронизации аутоиммунного воспаления, индуцируя продукцию других провоспалительных цитокинов и медиаторов воспаления, участвующих в патогенезе РС. Известно, что TNF-α обладает рядом биологических эффектов, в том числе усиливает перекисное окисление липидов, стимулирует продукцию γ-интерферона Т-лимфоцитами и апоптоз олигодендроцитов, вырабатывающих миелин. Предполагается участие TNF-α в формировании прогредиентного течения заболевания [4]. IL-1 — один из основных медиаторов патологического процесса при РС, который обладает способностью инициировать и регулировать воспалительные и иммунные процессы, стимулировать выработку белков острой фазы, провоспалительных цитокинов: TNF-α, IL-2, IL-6 и др. IL-1 стимулирует фагоцитоз, повышает проницаемость сосудистой стенки, оказывает цитотоксическую активность. Кроме того, TNF-α и IL-1 достаточно убедительно отражают динамику иммунопатологического процесса и коррелируют с клиническим течением заболевания [4]. Считается, что повышение продукции TNF-α и IЛ-1 является маркером активации патологического процесса при рассеянном склерозе [2]. Компенсация воспаления достигается за счет выработки противовоспалительных цитокинов — IL-4, IL-10. IL-4 оказывает положительный эффект на синтез цитокинов макрофагального происхождения — IL-1β, TNF-α, что потенцирует нейротрофическую функцию нейронов и аксонов.

Учитывая ведущую роль иммунных нарушений, лечение этого заболевания в первую очередь основывается на их коррекции. Нами было проведено иммунологическое исследование крови больных РС для определения активности патологического процесса и оценки иммуномодулирующего эффекта пентоксифиллина (Трентала), учитывая наши предварительные данные, подтверждающие не только ангиопротекторное, но и противовоспалительное действие [5]. Изучение уровней цитокинов давало возможность получить информацию о функциональной активности различных типов иммунокомпетентных клеток, оценить динамику иммунопатологического процесса и течения заболевания. Для изучения были выбраны ведущие цитокины, отражающие активность и выраженность аутоиммунного воспаления, — IL-1, IL-4, IL-10 и TNF-α. Иммунологическое исследование проводилось 20 пациентам в возрасте от 20 до 45 лет (12 женщин и 8 мужчин) с достоверным диагнозом РС, с ремиттирующе-прогрессирующим, первично-прогрессирующим и вторично-прогрессирующим течением заболевания и тяжестью по шкале EDSS от 4,5 до 6,5 балла. Они составили основную группу. Средний балл по EDSS составил 4,90 ± 0,18. Исследование проводилось до применения пентоксифиллина и после. В исследование были включены больные, уже получившие кортикостероидную, метаболическую и витаминотерапию в связи с обострением, однако эффект от лечения был нестабильным. Время, прошедшее после применения кортикостероидов и других иммуносупрессивных препаратов, составило от 2 до 3 месяцев, что давало возможность исключить их иммуносупрессивный эффект. В качестве группы сравнения были отобраны 20 здоровых человек, у которых определялись уровни IL-1, IL-4, IL-10 и TNF-α однократно. За норму принимались: TNF-α — 0–2,5 пг/мл; IL-1 — 0–11,2 пг/мл; IL-4 — 0–13 пг/мл, IL-10 — 0–12,5 пг/мл. Иммунологическое исследование крови включало количественную оценку концентрации в плазме крови IL-1, IL-4, IL-10, TNF-α методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител на программируемых аппаратах Wellwash 4 Mk 2, iEMS Incubator/Shaker и Multiskan Ascent производства Labsystems (Финляндия). Использовались реактивы, контрольные сыворотки и калибраторы ProCon IL-10 («Протеиновый контур», Россия), «Альфа-ФНО-ИФА-Бест» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия), «IL-1β-ИФА-Бест» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия), «IL-4-ИФА-Бест» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия) в соответствии с рекомендациями фирм-производителей.

Концентрация IL-1β, IL-4, IL-10 и TNF-α измерялась в пг/мл. Результаты реакции учитывали на ридере при длине волны 450 нм и обрабатывались при помощи программы Ascent. Кровь для исследования забирали из локтевой вены натощак, затем отстаивали 30 минут в термостате при температуре 37 °С до формирования плотного сгустка и центрифугировали 10 минут (1500 об/мин). Сыворотка отбиралась и до момента исследования хранилась при температуре –20 °С. Статистическую обработку результатов проводили по программе Меdstat, различия принимали за достоверные при р < 0,05.

Данные исследования провоспалительных и противовоспалительных цитокинов основной группы и группе здоровых лиц приведены в табл. 1.

Таким образом, несмотря на проводимую ранее кортикостероидную терапию, нами получено достоверное различие показателей как провоспалительных, так и противовоспалительных цитокинов у больных РС и здоровых лиц, р < 0,001. Иммунологические сдвиги у больных РС, находящихся вне клинического обострения, свидетельствовали о непрекращающейся активности заболевания и наличии текущего, достаточно выраженного хронического аутоиммунного воспаления при РС.

Повторное иммунологическое исследование было выполнено 20 больным РС после применения пентоксифиллина. Препарат назначался по схеме: внутривенно капельно 5,0 мл (100 мг) 2% раствора, предварительно разведенного в 200 мл 0,9% физиологического раствора. Инфузии проводились ежедневно в течение 10 дней с последующим переходом на прием per os в дозе 200 мг 3 раза в день в течение месяца (30 дней). Таким образом, общая длительность приема пентоксифиллина составила 40 дней.

Динамика концентрации провоспалительных и противовоспалительных цитокинов на фоне терапии пентоксифиллином показана в табл. 2.

Из данных табл. 2 видно, что после лечения достоверно снизились уровни провоспалительных цитокинов, p < 0,001. Таким образом, при изучении эффективности пентоксифиллина в качестве иммуномодулирующего препарата нами получен благоприятный клинический эффект, сочетающийся с достоверным снижением выработки провоспалительных цитокинов (TNF-α, IL-1), р < 0,001, и достоверным повышением экспрессии противовоспалительных цитокинов (IL-4, IL-10), р < 0,001, что подтверждало иммуномодулирующее действие препарата.

На фоне лечения существенно уменьшились жалобы больных на головную боль, головокружение, шаткость, чувствительные нарушения. Улучшение было подтверждено снижением тяжести по шкале неврологического дефицита EDSS. Средний балл до лечения составлял 4,90 ± 0,18, после лечения — 4,5 ± 0,1, р < 0,05.

Полученные результаты позволяют сделать вывод, что пентоксифиллин действительно обладает иммуномодулирующим, противовоспалительным и нейротрофическим действием и может быть рекомендован при частых рецидивах заболевания, длительных или вяло текущих обострениях, неэффективности стандартной терапии или при наличии противопоказаний к применению глюкокортикоидной терапии.

Bibliography

1. Столярова И.Д., Осетрова Б.А. Рассеянный склероз. — СПб., 2002. — 174 с.

2. Гусев И., Демина Т.Л. Рассеянный склероз // Consilium Medicum. — 2000. — Т. 2, № 2.

3. Гусев И., Бойко А.Н. Рассеянный склероз: достижения десятилетия // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. Рассеянный склероз. Приложение. — 2007. — Вып. 4. — С. 8-9.

4. Завалишин И.А., Захарова М.Н. и др. Прогредиентное течение рассеянного склероза // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. Рассеянный склероз. Приложение. Специальный выпуск. — 2002. — С. 26-31.

5. Евтушенко С.К., Грищенко А.Б., Евтушенко И.С. Иммуностимулирующее действие трентала // Международный неврологический журнал. — 2007. — № 6 (16). — С. 13-17.

6. Staubach K.-H., Traumann E., Zabel P. Effect of Pentoxifylline in Severe Sepsis // Archives of surgery. — 1998. — 133. — 94-100.

7. Yang S., Zhou M., Koo D.J., Wang P. Pentoxifylline prevents the transition from the hyperdynamic to hypodynamic response during sepsis // Am. J. Heart and Circulatory Physiology. — 1999 September. — Vol. 277, Issue 3. — h2036-h2044.

8. Chibowska, Krasowska D., Weglarz J. Pentoxyfilline treatment does not influence the plasma levels of IL-2 and sIL-2R in limited scleroderma patients // Med. Sci. Monit. — 2001. —7 (2). — 282-288.

9. Hohenberger P., Latz E., Kettelhack C. et al. Pentoxifyllin attenuates the systemic inflammatory response induced during isolated limb perfusion with recombinant human tumor necrosis factor-a and melphalan // Annals of Surgical Oncology. — 2003. — 10. — 562-568.

10. Marques J., Zheng L., Poulakis N., Guzman J., Costabel U. Pentoxifylline inhibits TNF-α production from human alveolar macrophages // American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. — 1999 February. — Vol. 159, № 2. — 508-511.

11. ter Horst S.A.J., Wagenaar G.T.M., de Boer E., van Gastelen M.A. et al. Pentoxifylline reduced fibrin deposition and prolongs survival in neonatal hyperoxic lung injury // J. of Applied Physiology. — 2004. — 97. — 2014-2019.

12. Quezado M.N., Hoffman W.D., Banks S.M. et al. Increasing doses of pentoxifylline as a continuous infusion in canine septic shock // The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. — 1999 January. — Vol. 288, Issue 1. — 107-113.

13. Oherty G.M., Jensen J.C., Alexander H.R. et al. Pentoxifylline supression of tumor necrosis factor gene transcription // Surgery. — 1991. — 110. — 192-198.

14. Schandene L., Vandenbussche P., Crusiaux et al. Differential effects of pentoxifylline on the production of tumor necrosis factor-alpha and interleukin-6 by monocytes and T-cells // Immunology. — 1992. — 76. — 30-34.

15. Crocker I.P., Baker P.N., Fletcher J. Neutrophil function in pregnancy and rheumatoid arthritis // Ann. Rheumatic diseases. — 2000. — 59. — 555-564.

16. Ieckmann P., Weber F., Guntner A. et al. Pentoxifylline. A phosphodiesterase inhibitor, induces immune deviation in patients with multiple sclerosis // J. Neuroimmunology. — 1996. — 64. — 193-200.

17. LeMay L.G., Vander A.J., Kluger M.J. The effects of pentoxifylline on lipopolysaccharide (LPS) fever, plasmаs IL-6 and TNF-α in mice // J. Physiology. — 1999. PMID:2104230[PubMed-indexed for MEDLINE].  

Gucci и The North Face представили совместную коллекцию

Модные бренды все чаще делают совместные проекты с аутдор-марками, а технологичность претендует на звание «нового люкса». Сегодня была представлена одна из долгожданных коллабораций в этом поле — Gucci и The North Face.

Итальянский модный Дом и американский бренд технологичной одежды показали результаты своего сотрудничества спустя три месяца после того, как появились первые тизеры готовящейся коллекции. Тогда короткие видео намекали на экипировку для активного отдыха — на них был показан горный пейзаж и развевающийся на его фоне флаг со сдвоенной эмблемой. 

Героями рекламной кампании, которая впервые была опубликована сегодня, стала группа туристов. Однако на них не только утепленные куртки, бомберы и жилеты из гусиного пуха, но и модные рубашки, юбки, комбинезоны и не только. Помимо одежды в коллекцию также вошли мягкие аксессуары, «походные» ботинки на шнуровке, чемоданы, палатки и спальные мешки. 

Верхняя одежда и экипировка вдохновлены оригинальным дизайном The North Face 1970-х. Палитра коллекции также отсылает к этому времени, некоторые цвета заимствованы из библиотеки материалов The North Face. Кроме того, в коллекцию частично вошли архивные ткани марки.

Ожидается, что коллекция дебютирует в поп-апе Gucci Pin в Пекине 29 декабря. В других странах коллаборация появится в январе. Некоторые предметы The North Face x Gucci также будет доступны на gucci.com — несколько из них можно будет приобрести только онлайн.

В Москве с 11 до 31 января эта коллекция будет представлена эксклюзивно в Gucci Pin в ЦУМе, а с 1 февраля — во всех магазинах Gucci.

Serum inflammatory cytokines IL-1β, IL-6, TNF-α and VEGF have influence on the development of diabetic retinopathy

Serum inflammatory cytokines IL-1β, IL-6, TNF-α and VEGF have influence on the development of diabetic retinopathy

 

Desislava N. Koleva-Georgieva1 / Nelly P. Sivkova1 / Dora Terzieva2
1Department of Ophthalmology
2Department of Clinical Laboratory, St. George University Hospital, Medical University, Plovdiv, Bulgaria
Citation Information: Folia Medica. Volume 53, Issue 2, Pages 44–50, ISSN (Online) 1314-2143, ISSN (Print) 0204-8043, DOI: 10.2478/v10153-010-0036-8, March 2013
Publication History:
Published Online:
2013-03-22

Abstract

 

Aim: The aim of this study was to analyze the correlation between serum levels of inflammatory cytokines IL-1β, IL-6, TNF-α and VEG F and the presence and severity of diabetic retinopathy (DR) in patients with type 2 diabetes mellitus (DM).

Patients and methods: In this prospective study we included 38 healthy volunteers (group 1) and 39 patients with type 2 DM (group 2). All participants underwent routine ophthalmological examination and laboratory analysis of the serum cytokines IL-1β, IL-6, TNF-α and VEG F. Group 2 patients were additionally examined by colour fundus photography and fluorescein angiography to determine the DR stage. We studied the correlation of IL- 1β, IL-6, TNF-α and VEG F with the presence of DM, the presence and severity of DR, the duration of DM and DR, the serum levels of glycosylated haemoglobin, as well as with hyperlipidemia and the general indicators of inflammation — erythrocyte sedimentation rate (ESR) and fibrinogen.

Results: The group 2 patients had statistically significantly higher levels of IL-1β (р = 0.01) and IL-6 (р = 0.029) and elevated TNF-α and VEG F levels in comparison with group 1 patients. Group 2 patients were divided into 5 subgroups depending on the severity of DR: patients without DR (n = 11), patients with mild non-proliferative DR (n = 10), patients with moderate non-proliferative DR (n = 5), and patients with severe non-proliferative DR (n = 2) (total number of non-proliferative DR (n = 17)) and patients with proliferative DR (n = 11). The comparative analysis showed statistically significant differences in the serum levels of IL-1β (р = 0.003), TNF-α (р = 0.002) and VEG F (р = 0.005) between the different subgroups. Patients with proliferative DR showed significantly higher values of serum IL- 1β (р < 0.0001), IL-6 (р = 0.007), TNF-α (р = 0.002) and VEG F (р < 0.0001) compared with the patients with non-proliferative DR. The cytokine serum levels did not correlate with the duration of DM, the duration of DR (except for IL-1β, р = 0.045), and hyperlipidemia (except for TNF-α, р = 0.05). TNF-α (р = 0.05) and VEG F (р = 0.047) serum levels correlated with the levels of glycosylated hemoglobin, and IL-1β, TNF-α and VEG F correlated with the general indicators of inflammation (ESR and fibrinogen).

Conclusion: Serum concentrations of IL-1β, TNF-α and VEG F have an effect on the development and progression of DR. They correlate with the presence and severity of the disease. Whether serum cytokines can play the role of a prognostic factor or serve as a means to choose a proper therapeutic agent for the treatment of diabetic retinopathy should be analyzed by further more extensive prospective longitudinal studies in future.

 

Abstract in russian

Резюме

 

Цель: Анализировать связь сывороточных уровней инфляматорных цитокинов IL-1β, IL-6, TNF-α и VEGF с наличием и тяжестью диабетической ре- тинопатии (ДР) у пациентов с сахарным диабетом (СД) типа 2.

Пациенты и методы: В проспективное исследо- вание включено 38 здоровых добровольцев (группа 1) и 39 пациентов с СД типа 2 (группа 2). Обе группы подвергнуты рутинному офтальмологическому осмотру и исследованию сывороточных IL-1β, IL- 6, TNF-α и VEGF, а пациентам группы 2 сделали фотографию глазного дна и флюоресцентную ангио- графию с целью определения стадии ДР. Авторы обследовали и связь сывороточных IL-1β, IL-6, TNF-α и VEGF с наличием и тяжестью СД, с давностью СД и ДР, с уровнем гликированного гемоглобина, с гиперлипидемией и с общими показателями воспа- ления (СОЭ и фибриноген).

Результаты: У пациентов группы 2 установлены значимо более высокие стоимости IL-1β (р = 0.01) и IL-6 (р = 0.029) и тенденция повышения TNF-α и VEGF по сравнению с группой 1. В зависимости от тяжести ДР пациенты группы 2 разделены на следующие подгруппы: без ДР (n = 11), с легкой непролиферативной ДР (n = 10), со среднетяжелой непролиферативной ДР (n = 5), с тяжелой непро- лиферативной ДР (n = 2) (непролиферативная ДР: n = 17 и пролиферативная ДР: n = 11).

Сравнительный анализ показал значимую разницу в сывороточных уровнях IL-1β (p = 0.003), TNF-α (p = 0.002) и VEGF (p = 0.005) между отдельными подгруппами. У пациентов с пролиферативной ДР установлены значимо более высокие стоимости сывороточных IL-1β (p < 0.0001), IL-6 (p = 0.007), TNF-α (p = 0.002) и VEGF (p < 0.0001) по сравне- нию с группой с непролиферативной ДР. Цитокины не коррелируют с давностью СД, с давностью ДР (за исключением IL-1β, p = 0.045), с гиперлипидемией (за исключением TNF-α, p = 0.05). Сывороточные уровни TNF-α (p = 0.05) и VEGF (p = 0.047) имели корреляцию с гликированным гемоглобином, а IL-1β, TNF-α и VEGF с общими показателями воспаления (СОЭ и фибриноген).

Заключение: Сывороточные концентрации IL-1β, TNF-α и VEGF оказывают влияние на развитие и прогрессию ДР. Они коррелируют с наличием и тяжестью заболевания. Смогут ли сывороточные цитокины служить прогностическим фактором или указывающим показателем в подборе медикамента для лечения ДР? Ответ на этот вопрос может дать анализ будущих проспективных лонгитуди- нальных исследований.

TMF Group расширяет присутствие в США, приобретая Venture Back Office

TMF Group, поставщик глобальных административных услуг, включая бухгалтерский учет и администрирование фондов, сегодня завершила сделку по приобретению Venture Back Office (VBO), американского стороннего поставщика решений для прямых инвестиций, реальных активов, кредита, и новые управляющие фонды.

В результате TMF Group теперь будет управлять активами на сумму более 150 миллиардов евро от имени своей глобальной клиентской базы управляющих фондами.

Приобретение является ключевой вехой в стратегии TMF Group по продолжению роста своего глобального бизнеса по предоставлению финансовых услуг и расширению своих возможностей на рынке Северной Америки, особенно в США. Сделка последовала за другими тщательно отобранными приобретениями, которые произошли в последнее время, в том числе приобретением бизнеса по управлению фондами State Street на Нормандских островах, IQ-Nexus в Нидерландах и Selectra, стороннего AIFM Manco в Люксембурге, — все они направлены на укрепление компании. предложение услуг фонда.

Ян Виллем ван Дриммелен, глава TMF Group в Северной Америке, говорит: «Мы рады приветствовать команду VBO в составе TMF Group. Рынок США особенно важен для группы, поскольку на него приходится 60% мирового рынка прямых инвестиций. Набор навыков VBO и знание местных требований значительно расширяют наши глобальные предложения и внутренние возможности — сочетание нашего глобального мышления в сочетании с местным опытом VBO выглядит очень мощным ».

VBO была основана в 2007 году и предоставляет широкий спектр услуг от администрирования фондов до услуг для инвесторов, а также решения для управляющих и портфельных компаний.Это один из немногих управляющих фондами, которые предоставляют услуги по оценке справедливой стоимости ASC 820.

Эндрю О’Ши, глобальный руководитель отдела фондовых услуг TMF Group, говорит: «Наша практика фондовых услуг обеспечивает колоссальный органический рост, и мы продолжаем укреплять нашу команду, проводя серию тщательно отобранных сделок M&A. Приобретение VBO — важная веха для TMF Group. Это наше первое приобретение US Fund Services, которое позволит нам предоставлять нашим клиентам еще больший спектр решений.

Говоря о переезде, Майк Горман, основатель VBO, сказал: «Быть ​​частью TMF Group будет полезно как для наших клиентов, так и для наших сотрудников. Их технологии, предложения услуг и глобальная сеть опытных профессионалов смогут поддержать планы роста наших клиентов и предложить сотрудникам возможности карьерного роста. Мы рады присоединиться к такой динамичной организации с глобальным присутствием и считаем, что это будет обогащающий опыт, который предоставит нам дополнительные возможности для развития наших основных сильных сторон.”

В этой сделке продавцам помогли RSM (налоговый консультант) и Смит Андерсон (юрисконсульт). TMF Group помогали Deloitte (консультант по налогам) и Майер Браун (советник по правовым вопросам).

TMF Group приобретает Venture Back Office

TMF Group , поставщик глобальных административных услуг, включая бухгалтерский учет и администрирование фондов, завершила приобретение Venture Back Office , американского стороннего поставщика услуг для частного капитала. , реальные активы, кредиты и средства новых управляющих.

Сделка последовала за другими выбранными приобретениями, которые произошли недавно, включая приобретение State Street по управлению фондами на Нормандских островах, IQ-Nexus в Нидерландах и Selectra сторонней компании AIFM Manco в Люксембурге. все это предназначено для усиления предложения компании по предоставлению финансовых услуг.

Ян Виллем ван Дриммелен , глава TMF в Северной Америке, сказал: «Мы рады приветствовать команду VBO в составе TMF Group.Рынок США особенно важен для группы, так как на нем сосредоточено 60% мирового рынка прямых инвестиций. Набор навыков VBO и знание местных требований значительно расширяют наши глобальные предложения и внутренние возможности — сочетание нашего глобального мышления в сочетании с местным опытом VBO выглядит очень мощным ».

Эндрю О’Ши , глобальный руководитель отдела фондовых услуг TMF, прокомментировал: «Наша практика фондовых услуг обеспечивает колоссальный органический рост, и мы усиливаем нашу команду серией тщательно отобранных сделок M&A.Приобретение VBO — важная веха для TMF Group. Это наше первое приобретение US Fund Services, которое позволит нам предоставлять нашим клиентам еще больший спектр решений ».

Майк Горман , основатель VBO, заявил: «Быть ​​частью TMF Group будет выгодно как для наших клиентов, так и для наших сотрудников. Их технологии, предложения услуг и глобальная сеть опытных профессионалов смогут поддержать планы роста наших клиентов и предложить сотрудникам возможности карьерного роста.Мы рады присоединиться к такой динамичной организации с глобальным присутствием и считаем, что это будет обогащающий опыт, который предоставит нам дополнительные возможности для развития наших основных сильных сторон ».

Продавцам помогли RSM (налоговый консультант) и Smith Anderson (юридический советник) в этой сделке. Группе TMF помогали Deloitte (налоговый консультант) и Mayer Brown (юридический советник).

Безопасность | Стеклянная дверь

Мы получаем подозрительную активность от вас или кого-то, кто пользуется вашей интернет-сетью.Подождите, пока мы подтвердим, что вы настоящий человек. Ваш контент появится в ближайшее время. Если вы продолжаете видеть это сообщение, напишите нам чтобы сообщить нам, что у вас возникли проблемы.

Nous aider à garder Glassdoor sécurisée

Nous avons reçu des activités suspectes venant de quelqu’un utilisant votre réseau internet. Подвеска Veuillez Patient que nous vérifions que vous êtes une vraie personne. Вотре содержание apparaîtra bientôt. Si vous continuez à voir ce message, veuillez envoyer un электронная почта à pour nous informer du désagrément.

Unterstützen Sie uns beim Schutz von Glassdoor

Wir haben einige verdächtige Aktivitäten von Ihnen oder von jemandem, der in ihrem Интернет-Netzwerk angemeldet ist, festgestellt. Bitte warten Sie, während wir überprüfen, ob Sie ein Mensch und kein Bot sind. Ihr Inhalt wird в Kürze angezeigt. Wenn Sie weiterhin diese Meldung erhalten, informieren Sie uns darüber bitte по электронной почте: .

We hebben verdachte activiteiten waargenomen op Glassdoor van iemand of iemand die uw internet netwerk deelt.Een momentje geduld totdat, мы узнали, что u daadwerkelijk een persoon bent. Uw bijdrage zal spoedig te zien zijn. Als u deze melding blijft zien, электронная почта: om ons te laten weten dat uw проблема zich nog steeds voordoet.

Hemos estado detectando actividad sospechosa tuya o de alguien con quien compare tu red de Internet. Эспера mientras verificamos que eres una persona real. Tu contenido se mostrará en breve. Si Continúas recibiendo este mensaje, envía un correo electrónico a para informarnos de que tienes problemas.

Hemos estado percibiendo actividad sospechosa de ti o de alguien con quien compare tu red de Internet. Эспера mientras verificamos que eres una persona real. Tu contenido se mostrará en breve. Si Continúas recibiendo este mensaje, envía un correo electrónico a para hacernos saber que estás teniendo problemas.

Temos Recebido algumas atividades suspeitas de voiceê ou de alguém que esteja usando a mesma rede. Aguarde enquanto confirmamos que Você é Uma Pessoa de Verdade.Сеу контексто апаресера эм бреве. Caso продолжить Recebendo esta mensagem, envie um email para пункт нет informar sobre o проблема.

Abbiamo notato alcune attività sospette da parte tua o di una persona che condivide la tua rete Internet. Attendi mentre verifichiamo Che sei una persona reale. Il tuo contenuto verrà visualizzato a breve. Secontini visualizzare questo messaggio, invia un’e-mail all’indirizzo per informarci del проблема.

Пожалуйста, включите куки и перезагрузите страницу.

Это автоматический процесс. Ваш браузер в ближайшее время перенаправит вас на запрошенный контент.

Подождите до 5 секунд…

Перенаправление…

Заводское обозначение: CF-102 / 6815b65818bc3769.

Безопасность | Стеклянная дверь

Мы получаем подозрительную активность от вас или кого-то, кто пользуется вашей интернет-сетью. Подождите, пока мы подтвердим, что вы настоящий человек. Ваш контент появится в ближайшее время.Если вы продолжаете видеть это сообщение, напишите нам чтобы сообщить нам, что у вас возникли проблемы.

Nous aider à garder Glassdoor sécurisée

Nous avons reçu des activités suspectes venant de quelqu’un utilisant votre réseau internet. Подвеска Veuillez Patient que nous vérifions que vous êtes une vraie personne. Вотре содержание apparaîtra bientôt. Si vous continuez à voir ce message, veuillez envoyer un электронная почта à pour nous informer du désagrément.

Unterstützen Sie uns beim Schutz von Glassdoor

Wir haben einige verdächtige Aktivitäten von Ihnen oder von jemandem, der in ihrem Интернет-Netzwerk angemeldet ist, festgestellt.Bitte warten Sie, während wir überprüfen, ob Sie ein Mensch und kein Bot sind. Ihr Inhalt wird в Kürze angezeigt. Wenn Sie weiterhin diese Meldung erhalten, informieren Sie uns darüber bitte по электронной почте: .

We hebben verdachte activiteiten waargenomen op Glassdoor van iemand of iemand die uw internet netwerk deelt. Een momentje geduld totdat, мы узнали, что u daadwerkelijk een persoon bent. Uw bijdrage zal spoedig te zien zijn. Als u deze melding blijft zien, электронная почта: om ons te laten weten dat uw проблема zich nog steeds voordoet.

Hemos estado detectando actividad sospechosa tuya o de alguien con quien compare tu red de Internet. Эспера mientras verificamos que eres una persona real. Tu contenido se mostrará en breve. Si Continúas recibiendo este mensaje, envía un correo electrónico a para informarnos de que tienes problemas.

Hemos estado percibiendo actividad sospechosa de ti o de alguien con quien compare tu red de Internet. Эспера mientras verificamos que eres una persona real.Tu contenido se mostrará en breve. Si Continúas recibiendo este mensaje, envía un correo electrónico a para hacernos saber que estás teniendo problemas.

Temos Recebido algumas atividades suspeitas de voiceê ou de alguém que esteja usando a mesma rede. Aguarde enquanto confirmamos que Você é Uma Pessoa de Verdade. Сеу контексто апаресера эм бреве. Caso продолжить Recebendo esta mensagem, envie um email para пункт нет informar sobre o проблема.

Abbiamo notato alcune attività sospette da parte tua o di una persona che condivide la tua rete Internet.Attendi mentre verifichiamo Che sei una persona reale. Il tuo contenuto verrà visualizzato a breve. Secontini visualizzare questo messaggio, invia un’e-mail all’indirizzo per informarci del проблема.

Пожалуйста, включите куки и перезагрузите страницу.

Это автоматический процесс. Ваш браузер в ближайшее время перенаправит вас на запрошенный контент.

Подождите до 5 секунд…

Перенаправление…

Заводское обозначение: CF-102 / 6815b6690fa04c85.

TMF Group — Расчет заработной платы

TMF Group — Расчет заработной платы

Для кого предназначена эта оценка поставщика?
Профиль услуг по расчету заработной платы NelsonHall в TMF Group представляет собой комплексную оценку ее предложений и возможностей, предназначенную для:
• Менеджеры по снабжению отслеживают возможности существующих поставщиков услуг по управлению заработной платой и определяют пригодность поставщиков для услуг безопасности. Запрос предложений
• Маркетинг поставщиков, продажи, и бизнес-менеджеры, стремящиеся сравнить себя со своими коллегами
• Финансовые аналитики и инвесторы, специализирующиеся в сфере технологий и услуг в сфере управления персоналом и заработной платы.

Ключевые выводы и основные моменты
TMF Group, основанная в 1988 году со штаб-квартирой в Амстердаме, Нидерланды, является частной многонациональной компанией, предоставляющей профессиональные услуги для корпораций, рынков капитала, фондов и семейного бизнеса, включая HR и расчет заработной платы, бухгалтерский учет и налоги. , корпоративный секретарь и глобальное управление юридическими лицами.

С момента своего основания TMF Group укрепила свое глобальное присутствие и возможности за счет сочетания органического роста и стратегических приобретений.Услуги TMF Group в совокупности поддерживают> 60% компаний из рейтингов Fortune 500 и FTSE 100.

TMF Group предоставляет услуги компаниям, инвестирующим, действующим и расширяющимся в нескольких юрисдикциях:
Бухгалтерский учет и налоги
Global Entity Management (GEM) и корпоративный секретарь
HR и заработная плата, в том числе:
Услуги по международному управлению жизненным циклом сотрудников
Международные кадровые проекты и консалтинг
Услуги по управлению заработной платой в поддержку 144 стран
Выплаты международным сотрудникам
— Рынки капитала
Услуги фонда
Услуги для семейного бизнеса и семейных офисов.

TMF Group нацелена на свои услуги по расчету заработной платы транснациональным корпорациям любого размера, ища кадровую и заработную плату для групп сотрудников и операций по всему миру. Его крупнейший клиент управляемых услуг работает в ~ 67 странах. Его текущая клиентская база состоит из нескольких региональных фирм, при этом компании со штаб-квартирой в регионе EMEA обеспечивают ~ 46% доходов от фонда заработной платы.

Объем отчета
В отчете представлен всесторонний и объективный анализ предложений TMF Group по расчету заработной платы, возможностей, рыночных и финансовых сильных сторон, в том числе:
• Определение стратегии компании, акцентов и новых разработок
• Анализ сильные и слабые стороны и перспективы компании
• Оценка выручки
• Анализ профиля клиентской базы компании, включая стратегию таргетинга компании и примеры текущих контрактов
• Анализ предложений компании и ключевых компонентов услуг
• Анализ поставок компании организация, включая расположение пунктов доставки.

Технические группы подталкивают TMF к внесению изменений в погашение для ускорения новых расходов — MeriTalk

Группа из десяти торговых групп технологического сектора во главе с Альянсом цифровых инноваций (ADI) обращается к Администрации общих служб (GSA) и Управлению управления и Бюджет (OMB) для внесения значительных изменений в правила и политику Фонда модернизации технологий (TMF), включая те, которые касаются обязательств по выплате.

Предложения направлены на быстрое освоение 1 миллиарда долларов, одобренного Конгрессом в американском плане спасения, для ускорения модернизации федеральной ИТ.

Послушайте представителя Коннолли и Стива Харриса из Dell Technologies, подробно обсуждающего TMF. Смотреть

Технические группы изложили свой обширный список запросов на изменение политики в письме от 24 марта исполняющему обязанности администратора GSA Кэти Кейл, федеральному ИТ-директору Клэр Марторана и исполняющему обязанности директора OMB Роберту Фэйрвезеру. TMF находится в ведении GSA через правление под председательством федерального директора по информационным технологиям.

В заголовке списка предлагаемых изменений политики TMF находятся предложения по изменению требований к пятилетнему погашению для агентств, которые занимают у фонда, отказу от платы за услуги, которые помогают оплачивать офис программы TMF, и отправке технических экспертов в агентства-заемщики для помощи. со своими проектами модернизации.

Технические группы также прислали список типов проектов, которые, по их мнению, созрели для финансирования TMF. В их число входят:

• Списание устаревших ИТ-систем;
• Общекорпоративные обновления возможностей идентификации, совместной работы и безопасного обмена данными;
• Улучшение функций обслуживания граждан в соответствии с Законом 21 ^st Century IDEA, включая безопасный мобильный доступ к федеральным и государственным веб-сайтам, формам и записям;
• Инвестиции в технологии долгосрочной удаленной работы и гибридной работы;
• общих служб кибербезопасности; и
• Безопасное внедрение облака.

Новые возможности для инвестиций

«С новой администрацией и миллиардом долларов в TMF, это действительно новая возможность изменить масштабы, операционную модель и масштаб того, для чего был разработан TMF — для стимулирования реальной цифровой трансформации и улучшений кибербезопасности. по всем направлениям », — сказал Мэтью Корнелиус, исполнительный директор ADI, в интервью MeriTalk.

«Это письмо от нескольких ассоциаций представляет то, что мы считаем невероятно практичными и полезными рекомендациями по реформированию операционной инфраструктуры хвостохранилища, чтобы быстро направить эти деньги на решение проблем, которые, как мы знаем, еще предстоит решить из-за пандемии, но также и для обеспечить лучшие проекты », — сказал он.

«Главное, что мы не хотим, чтобы OMB и GSA просто думали о том, что они делают с этим миллиардом долларов — мы хотим, чтобы они были настолько успешны в его выполнении, чтобы был еще один миллиард, или три миллиарда, или девять миллиардов, которые приходи позже, — сказал Корнелиус.

Стимулирование потребности TMF

TMF, недавно отметивший свою трехлетнюю годовщину, был создан в соответствии с Законом о модернизации государственных технологий (MGT) для финансирования проектов модернизации ИТ Федерального агентства.С тех пор фонд получил 175 миллионов долларов ассигнований, и ранее в этом месяце сообщил, что на сегодняшний день он выделил 125 миллионов долларов на финансирование 11 проектов модернизации.

Относительно скромный спрос на деньги от хвостохранилища частично объясняется пятилетним обязательством погашения, которое должно быть получено за счет сбережений от финансируемых проектов, говорят в частном порядке многочисленные федеральные чиновники по технологиям.

В основе предложений технических групп лежит стремление ослабить правила фондов для быстрого использования новых денег для укрепления федеральных систем, испытанных пандемией и подвергшихся недавним громким кибератакам.

По их словам, быстрое развертывание нового финансирования «начнет высвобождать необходимые и давно назревшие инвестиции в современные коммерческие возможности по всему федеральному правительству для решения проблем восстановления COVID-19 и преобразования устаревших ИТ-систем».

«Федеральные агентства должны быть оснащены лучшими технологиями и инструментами безопасности, доступными для реагирования на COVID-19 и предоставления наилучших услуг американскому народу», — заявили группы. «К сожалению, существует множество устаревших ИТ-систем со слабой безопасностью, которые все еще используются федеральным правительством, что является препятствием на пути к достижению этих целей.”

И они утверждали, что быстрое развертывание нового финансирования соответствует намерению Конгресса при утверждении расходов. «Финансирование было предоставлено в виде чрезвычайных ассигнований», — сказали в группах. «Таким образом, вполне естественно, что Конгресс будет ожидать, что деньги TMF будут потрачены быстро и эффективно для решения проблем, связанных с модернизацией федеральных ИТ, кибербезопасностью и предоставлением услуг, которые стали еще более трудными в результате усилий по реагированию на COVID-19».

В отсутствие изменений в правилах погашения и «обременительных» процессов подачи заявок, группы заявили, что федеральные агентства могут и дальше уклоняться от TMF.Они заявили, что Закон о MGT предоставляет OMB полномочия по изменению условий погашения, и призвали агентство «использовать эти полномочия для срочных высокоприоритетных проектов, направленных на решение этих критических проблем».

«Изменение или значительное продление пятилетнего окна погашения также увеличит вероятность того, что TMF сможет инвестировать в критически важные межведомственные проекты или коммерческие совместные услуги, которые требуют стабильного финансирования в течение нескольких лет и могут занять лет, чтобы продемонстрировать экономию и вывести из обращения существующие устаревшие системы и процессы », — заявили в группе.

Определение общих возможностей

«Этот подход позволит OMB, GSA и Совету TMF использовать гибкость операционной модели TMF, чтобы обеспечить финансирование общих возможностей модернизации в одном или нескольких агентствах, сделать немедленное вливание капитала для решения этих устаревших ИТ-проектов и процессов, и значительно повысить безопасность государственных органов », — заявили группы.

По их словам, это «сделает доллары TMF более доступными и более простыми в использовании для решения сквозных проблем ИТ и безопасности, которые все еще преследуют федеральные агентства более года после начала реагирования на пандемию.”

Технические группы умоляли правление TMF заявить о своих предпочтительных приоритетах финансирования агентствам и отрасли и работать «совместно, чтобы найти лучшие возможности для инвестиций в федеральном правительстве, а не просто ждать, пока будут представлены потенциальные проекты».

Расширенная поддержка GSA

Технические группы также призвали к дополнительной поддержке со стороны офиса управления программами GSA для поддержки вероятного увеличения числа проектов, финансируемых TMF.

«Во-первых, GSA потребуется более сильная команда для работы с OMB и межведомственная группа, чтобы помочь в выявлении, проверке и поддержке разработки новых проектных предложений, соответствующих сегодняшним национальным задачам», — заявили группы.

«Этот процесс, вероятно, будет многогранным и постоянно развивающимся, поэтому, вероятно, потребуется взвешенная, но высококвалифицированная команда технологов, специалистов по закупкам, экспертов по безопасности и специалистов по поддержке взаимодействия с клиентами», — заявили в группах.Они продолжили: «Было бы разумно предоставить всем получателям награды, по их усмотрению, любых специалистов по техническим вопросам, безопасности, управлению программами или приобретению, которые могут помочь повысить вероятность успешного выполнения на всем протяжении жизненного цикла инвестиций в TMF. . »

Роль в отрасли

И группы выступили за продолжение использования «прочных партнерских отношений с промышленностью и принятия современных технических подходов для наилучшего обеспечения успеха проекта TMF и, таким образом, долгосрочной устойчивости самого Фонда.”

«Наличие дополнительных технических знаний для TMF не отрицает способности промышленности предоставлять самые инновационные решения для проектов Фонда — напротив, это почти наверняка означает, что проекты, вероятно, будут разрабатываться и реализовываться самыми передовыми способами. уже внедряются в коммерческом секторе, и это потребует участия и поддержки промышленности для достижения успешных результатов », — заявили они.

«OMB, GSA и Правление TMF не должны полагаться исключительно на идеи, исходящие от агентств, пытаясь определить инвестиционные возможности TMF в правительстве, но должны также работать с промышленностью», — заявили группы.Они попросили «регулярно проводить открытые встречи» с лидерами отрасли ИТ и безопасности, «представляющими разнообразие технологических платформ и доступных путей решения», и ежеквартально проводить встречи для обмена информацией и обновлениями статуса с представителями отрасли.

Наряду с ADI, это письмо подписали следующие организации: Альянс коммерческих технологий в правительстве; Коалиция за лучшую идентичность; Центр пропаганды закупок; CompTIA; Коалиция по кибербезопасности; Коалиция цифровых услуг; Совет индустрии информационных технологий; Интернет-ассоциация; и Ассоциация индустрии программного обеспечения и информации.

Узнайте, как TMF Group добилась увеличения MQL на 82% и рентабельности инвестиций на 2,101%

Узнайте, как TMF Group смогла повысить квалификацию своей внутренней команды, повысить сложность кампании и достичь целей трансформации бизнеса.

О TMF Group

TMF Group — глобальный поставщик услуг в области управления персоналом и заработной платы, бухгалтерского учета и налогообложения, корпоративного секретаря, глобального управления и администрирования для компаний, стремящихся выйти в новые географические регионы. С 1988 года TMF помогает компаниям расширяться на международном уровне, используя опыт и знания внутри страны для работы как на своих внутренних рынках, так и за их пределами.

Их независимые эксперты понимают местный рынок и связанные с ним юридические, финансовые и нормативные требования, чтобы позволить своим клиентам вести бизнес в любой стране и соблюдать местные и международные нормы.

TMF работает в 83 странах, предоставляя 15 000 клиентов любого размера и в различных отраслях промышленности, предоставляя критически важные для бизнеса финансовые и административные услуги на местах.

Конкретные вопросы или задачи, требующие решения

При работе с Really B2B с 2017 года была разработана кампания по поиску потенциальных клиентов, чтобы:

• Расширять разведку в Великобритании
• Увеличивать присутствие с транснациональными корпорациями США и Азиатско-Тихоокеанского региона, выходящими за границу
• Увеличивать базу данных и нацеливание на сложности
• Совместите их разрозненный стек технологий
• Создайте программу воспитания для решения 24-месячного + цикла продаж
• Доказательная стратегия автоматизации маркетинга (MA) была разработана в качестве экономического обоснования для совета директоров.

Используя эту стратегию, TMF достигла:

• 121% -ное увеличение MQLS
• 1768% -ное увеличение рентабельности инвестиций в конвейер
• Победитель конкурса «Лучшее использование MA» на B2B Martech Awards

После этого успеха необходим 2019 год. чтобы вывести деятельность на новый уровень.

Ориентация и рост:

1. В соответствии с изменением направления бизнеса: За последние три года TMF приобрела более 300 поставщиков профессиональных услуг по всему миру, и каждое приобретение приносит их собственные списки клиентов.На уровне совета директоров было принято решение сосредоточиться на привлечении клиентов и росте, а не на поиске в течение 2019 года, а также на маркетинговой стратегии, необходимой для согласования.
2. Автоматизация маркетинга на основе учетных записей: Чтобы продвинуть кампании для клиентов на шаг вперед и увеличить количество клиентов, TMF захотела изучить маркетинговый подход на основе учетных записей, поддерживаемый MA, для нацеливания на ключевые возможности роста в рамках клиентской базы.

Расширение возможностей внутренней команды:

1. Составьте надежный план обучения для повышения квалификации внутренней маркетинговой команды TMF: Работая с Really B2B, TMF наращивала свои ресурсы продаж и маркетинга внутри компании и имела желание (а теперь и ресурсы ), чтобы стать более ответственным за программу магистратуры.
2. Продолжайте внедрять инновации: Несмотря на то, что TMF взяла на себя эту деятельность, они понимают ценность постоянного совершенствования. Требовалась четкая дорожная карта, чтобы гарантировать создание новых подходов, кампаний и инициатив Really B2B одновременно с повышением квалификации внутренней команды TMF по предыдущей и текущей деятельности.

Технический стек:

1. Выровняйте позвоночник: Несмотря на то, что Marketo использовался для деятельности в Великобритании, каждая региональная маркетинговая команда (APAC, EMEA и Америка) по-прежнему работала на нескольких платформах.Требовалась консолидация платформ отправки электронной почты, CRM и баз данных, при этом Marketo использовался в качестве центрального инструмента для управления всей маркетинговой деятельностью.
2. Повышение сложности: Чтобы использовать технологию, необходимо было проанализировать дополнительные функции и плагины, чтобы связать воедино всю маркетинговую стратегию.

Существующая инфраструктура martech

До начала проекта инструменты автоматизации маркетинга отсутствовали.Стратегия предусматривала объединение нескольких каналов и маркетинговых технологий, отступление и запуск с одной центральной тактической и оперативной платформы. С помощью отраслевых стандартных, хорошо разработанных API-интерфейсов были интегрированы формы Sitecore, функции LinkedIn LeadGen и сбор данных веб-семинаров с использованием Marketo в качестве центральной точки для обработки и хранения всех контактных и поведенческих данных.

Стратегия и развертывание

Для достижения целей и решения описанных проблем в технологической дорожной карте, первоначально созданной для пилотного проекта, были использованы как извлеченные уроки, так и достигнутые успехи.

Интеграция данных:

Marketo: Marketo был выбран из-за сложных инструментов управления данными платформы, проверенного опыта интеграции API с другими технологиями, а также надежных и полнофункциональных возможностей доставки кампании для поддержки ряда маркетинговая деятельность. Кроме того, благодаря мощным функциям отслеживания результатов и отчетности Marketo было сочтено, что он идеально подходит для эффективного расчета рентабельности инвестиций и результатов.

Agency CRM (Vortex): Vortex обеспечивает полную прозрачность данных.Благодаря тому, что данные из Marketo поступали в Vortex, это означало, что команда клиентских служб Really B2B в реальном времени обновляла отдельные действия (открытие электронной почты, нажатие ссылки, ответы, просмотры веб-страниц и т. Д.) На уровне контактов и компании.

Microsoft Dynamics: TMF использует MS Dynamics по всему миру для управления потенциальными возможностями, контроля процесса продаж и централизации данных о клиентах и ​​потенциальных клиентах в едином представлении о клиентах. Было принято решение подключить Marketo к MS Dynamics, чтобы упростить процесс управления данными и обеспечить доступность всех данных во всех системах без необходимости ручного вмешательства.

Merit : Merit — это сторонняя платформа управления данными, используемая TMF. Группа обработки данных может использовать систему Merit для обновления, добавления и замены контактов, обеспечивая максимальную точность данных. Это позволяет поддерживать чистую и безошибочную базу данных контактов и передавать ее в инфраструктуру Marketo / MS Dynamics.

Обучение: Полное обучение TMF было проведено компанией Really B2B.

• Изначально основные настройки и знания Marketo были переданы команде TMF UK.
• Обучение суперпользователей и управлению данными для ключевого персонала хвостохранилища с целью обучения их навыкам, необходимым для того, чтобы приступить к управлению и реализации комплексных программ воспитания и соответствующей подготовки данных.
• Обучение проводится для более широкой маркетинговой команды Великобритании и Нидерландов.
• Обучение расширилось до региональных маркетинговых команд, включая EMEA, APAC и Америку, чтобы согласовать и стандартизировать маркетинговую стратегию на глобальном уровне и позволить им использовать Marketo для проведения своих маркетинговых кампаний на местах в каждом регионе.

На самом деле B2B продолжает развивать успехи и сложности кампании в следующие 12 месяцев, передавая достижения предыдущих лет команде TMF в масштабируемой и управляемой форме, что позволяет TMF поддерживать постоянное совершенствование как своей маркетинговой деятельности, так и своей собственной внутренний рост команды.

Стратегия ABM: Стратегия ABM была разработана для работы в соответствии с основной деятельностью с целью увеличения счетов. TMF определила самые большие возможности для роста счетов, однако, поскольку они уже являются крупными спонсорами, возникли сомнения по поводу того, что их будут воспринимать как «настойчивые».

Чтобы преодолеть это, изначально с использованием Marketo была создана программа воспитания, которая вначале обслуживала электронные письма с указанием содержания, указывающие на специальные целевые страницы. Это вызывает показ медийной рекламы на основе IP. Используя модуль ABM от Marketo, слушание намерений и сотрудничество с директорами клиентов, был разработан процесс скоринга, который запускает спринты ABM, когда учетные записи сильно задействованы.

Влияние на бизнес

Ориентация на бизнес: Используя знания и уроки, полученные в ходе пилотной разведки, TMF смогла плавно переключиться на ориентацию на клиентов в своих запросах и привлечении потенциальных клиентов.Это привело к повышению осведомленности клиентов, росту доходов от перекрестных и дополнительных продаж, а также к трансформации бизнеса с помощью маркетинговых возможностей.

Сегментация данных позволила TMF предложить более высокий уровень обслуживания клиентов за счет согласования и назначения специальных директоров по работе с клиентами для всех вновь приобретенных учетных записей.

Внедрение стратегии ABM выявило самые высокие драйверы доходов и дало TMF возможность достичь этих счетов на более целенаправленном уровне.Эта стратегия будет по-прежнему применяться в компаниях-аналогах, склонных к увеличению расходов.

Расширение возможностей команды: Тренинги для агентств не только позволили британской маркетинговой команде продолжить успешную текущую деятельность, но и выровняли все региональные команды, обучив их до одного уровня и расширив успешную британскую программу до глобальный уровень.